（一）培養基的類型

　　培養基的種類很多，為了研究方便，通常根據培養基的一些性質把它們分為不同的類型。

　　1．根據營養物質的來源不同來區分

　　(1)合成培養基  由已知化學成分及數量的化學藥品配制而成。它適合于某些定量工作的研究，以減少不能控制的因素。此外，培養自養菌也是用成分簡單的無機鹽類配制的培養基。

　　(2)天然培養基用天然物質或其浸出汁配制而成。肉汁、酵母浸出汁、麥芽汁、米曲汁、豆芽汁、馬鈴薯汁、麩皮等都是常用的天然營養原料，適合于培養許多異養型微生物。

　　(3)半合成培養基由部分天然物質和一些成分已知的化學藥品配制而成。

　　2．根據培養基的用途區分

　　(1)基礎培養基其組成物質能基本上滿足一般微生物生長繁殖的需要。它的主要作用是促使微生物良好地生長。例如牛肉膏蛋白胨培養基，是適合于細菌培養的一種基礎培養基；馬鈴薯葡萄糖培養基是適合于霉菌培養的基礎培養基；麥芽汁培養基適合于酵母菌及霉菌培養；高氏一號培養基適合于放線菌的培養。

　　(2)富集培養基由基礎培養基加入某些特殊的營養物質，如血液、血清、酵母膏或其他生長因子而成，用以培養某些對營養要求較特殊的微生物。例如有些霉菌缺乏一種或數種氨基酸合成的能力，則培養時在馬鈴薯葡萄糖培養基中加入相應的氨基酸或適量的蛋白胨，就可使這些霉菌正常生長。

　　(3)選擇培養基它是根據微生物對某一化學物質的不同抗性或對某種營養物質的特殊需求而設計的培養基，常被用來分離某一種或某一類特定的微生物。例如含有青霉素或鏈霉素等抗生素的培養基，可以從混雜的微生物群體中，分離出霉菌或酵母菌；用纖維素為唯一碳源的培養基，可分離得到分解纖維素的微生物。

　　(4)鑒別培養基主要用于菌種的鑒定。這種培養基中含有某些化學藥品或指示劑，當某種微生物在該培養基中生長時，可表現出一種特殊的特征，使不同種類的微生物被區分開。

　　3．根據培養基的狀態區分

　　根據培養基制成后的狀態，可將培養基分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。它們之間的區別在于是否加有凝固劑以及凝固程度�？勺鳛榕囵B基凝固劑的物質主要有瓊脂、明膠、硅膠等。瓊脂是目前比較理想的凝固劑，它是從海藻中提取的一種多糖，不被絕大多數微生物所分解利用，具有較高的熔點（96℃以上），較低的凝固點(40℃)，且對微生物沒有毒性。固體培養基一般加瓊脂1.5%~2.0%，半固體培養基一般加瓊脂0.2%~0.7%，液體培養基中則不加凝固劑。用一些天然固形物作培養基時，也稱為固體培養基。各種狀態培養基的用途如下：

　　(1)固體培養基可以使所培養的微生物形成肉眼可見的菌落。在微生物分離、鑒定、計數和保藏等方面都采用這種培養基。

　　(2)半固體培養基在實驗室中主要用來培養細菌，觀察細菌的運動特性等。

　　(3)液體培養基容易使培養體系內的營養物質保持均勻狀態，有利于微生物充分利用營養物質，積累代謝產物，所以在實驗室和發酵工業生產中被廣泛采用。

　�。ǘ�）制備培養基的一般原則

　　(1)所有微生物的培養基都應包含有碳源、氮源（有機氮、無機氮）、水及無機鹽類，有些微生物生長還需要某種特殊的生長素。

　　(2)根據培養微生物的目的來選擇合適的營養物。例如能利用纖維素的微生物在以葡萄糖為碳源的培養基中能正常生長；但如果是為了獲得纖維素酶，則培養基中的碳源應該選用纖維素，以利于誘導細胞合成纖維素酶。

　　(3)在不影響培養效果的前提下，還應從經濟、易得、配制方便等方面加以考慮選擇培養基的營養物質。這方面，在配制工業發酵培養基時尤為重要。

　 （4）各種營養物質必須適量添加，合理配比。培養基中碳源和氮源的含量及比例對微生物的生長、代謝都有很大的影響。過高或過低的碳源和氮源含量都會抑制微生物的生長。在配制培養基時考慮更多的是碳源和氮源含量的比值，即C/N的問題。就一般菌體培養而言，細菌、酵母菌需要較多的氮素營養物，培養基的C/N在5:1左右；霉菌則需要較多的碳素營養物，培養基的C/N在10:1左右。對于工業發酵生產，則要通過調節培養基的C/N來控制微生物的代謝。各種礦質元素的含量，也要嚴格控制和均衡，某種單一元素含量過高，可影響其他礦質元素的吸收，甚至對細胞產生毒害作用。配制培養基時，通用一些多功能的無機鹽提供礦質元素。例如將適量KH2P04和Na2HPO4添加到培養基中不僅可作為微生物K、Na、P這三種礦質元素的來源，而且這兩種鹽還可作為緩沖劑，穩定培養基的酸堿度。

　�。�5）各種微生物都有一定的生長pH范圍和最適的生長pH。因此必須把培養基的pH調到微生物適宜生長范圍。一般來說，細菌適宜于中性至偏堿性的環境，其生長的pH范甚多在4~10，最適生長pH通常為7.0~7.5；酵母菌和霉菌適宜生長在偏酸性的環境中，其生長pH范圍多在1~8，最適生長pH多為4.5～6。

　�。�6）培養基的滲透壓是由各種營養物質的濃度決定的。大多數微生物在正常營養物質濃度的滲透壓下就能良好生長；但有的微生物的生長需要有較高的滲透壓。為此，可額外加入些糖或無機鹽來調節滲透壓。發酵工業上高濃度的營養基質有利于增加產量和提高設備的利用率，但過高的滲透壓會抑制菌體生長，所以要根據生產菌的滲透壓特性，來配制適當的營養物濃度的基質。

　�。ㄈ�）培養基的制備方法

　　培養基種類很多，釀酒工業上培養霉菌及酵母菌一般均采用自然培養基。下面是幾種釀酒常用養基的配制方法。

　　1.米曲汁培養基的制備

　　將洗凈的大米，常溫下浸泡，將水濾去后，蒸米40min，取出加一定量的冷水，并將米粒搓散，再蒸，散冷后接種黃曲霉或米曲霉的三角瓶原菌，在保溫箱中培養，待米粒變黃未生出孢子時，取出干燥備用；取米曲于4倍水中，于60℃糖化3～4h。用碘液試之不呈藍色反應后，繼續加熱到90℃，過濾得米曲汁，備用；米曲汁加瓊脂1.8%~2%，加熱溶解后，分裝于試管中，加棉塞，高壓滅菌30min后放置成斜面，待其凝固后，在32℃保溫箱中培養干燥5～7d，等試管壁上無凝結水，培養基上無雜菌后即可使用。在無菌條件下，向試管斜面培養基上接曲霉菌孢子少許，在32℃保溫箱中培養6d，等孢子成熟后，檢查有無雜菌，取出放在冰箱中備用。

　　2.葡萄糖豆芽汁培養基的制備

　　將黃豆用水沖洗干凈，浸泡12～15h（夏季應注意換水l~2次），使黃豆吸水膨脹。然后倒去余水，放于瓷盤等容器內，上蓋濕布，20~25℃保溫，每天用溫水沖洗1～2次，至芽長5cm左右時即可使用。黃豆發芽的另一個方法是將浸泡過的黃豆放在用水拌濕的鋸木屑內，黃豆即可發芽生長。該法優點是生長過程中不需要管理，而且生長迅速。也可買市售的黃豆芽。洗凈的黃豆芽lOOg，加水1OOOmL，煮沸40min，用紗布過濾，濾液用水補充至原來的體積(lOOOmL)，即為10%的豆芽汁。如加入適量的葡萄糖，則為葡萄糖豆芽汁培養基。

　　3．麥芽汁培養基的制備

　　普通大麥浸泡1d，置于木制或草制筐內，面上蓋1層濕布，保溫20℃左右，每天沖水1~2次，至芽長為大麥本身的1倍時，即可風干，搗碎，制成大麥芽粉。也可買現成的麥芽。lkg大麥芽粉，加55~60℃溫水4kg左右，在55~60℃水浴鍋中保溫糖化3～4h，至液體中加碘無淀粉反應為止（檢查方法同米曲汁制備）。再用紗布過濾，裝瓶加棉塞，并包扎油紙，0.1MPa蒸汽高壓滅菌25~30min，殺菌后雜質沉淀，貯存備用。

　　麥芽汁制備的另一個方法是稱取大米0.5kg，加水3~3.5kg，煮成稀飯，涼至60℃，加麥芽粉0.5kg，攪拌均勻，55~60℃保溫，水浴鍋糖化4～6h，過濾，所得濾液即為麥芽汁。其濃度約為13°Bx。這種方法一般在麥芽供應不足時采用。

　　4．葡萄糖馬鈴薯培養基制備

　　將馬鈴薯去皮切成薄片，切片后立即浸于水中，以免氧化變黑。每200g馬鈴薯加自來水lOOOmL，加熱至80℃，熱浸1h。用紗布過濾，濾液用水補足至1OOOmL，加入5%葡萄糖，攪拌溶解，即為葡萄糖馬鈴薯培養基。若馬鈴薯煮得過爛，則對菌生長不利。本培養基適用于根霉及產酯酵母的培養。如能以30%～40%的比例與麥芽汁或米曲汁混合使用則更好。

　　5．甜酒水培養基

　　將糯米淘洗干凈，浸泡后蒸煮成飯，冷涼至30℃左右拌入根霉甜酒曲（不含酵母），裝入清潔容器內，保溫30℃培養1～2d后即成甜酒釀，煮沸后過濾，濾液即為甜酒水培養該培養基含葡萄糖較多，若制成固體培養基累代培養，將使霉菌糖化力和酵母發酵力下降，故多用于生產上作擴大培養時的三角瓶種子液用。

　　6．麩皮固體培養基

　　將較粗的麩皮加水70%~80%，充分拌勻，裝入試管或三角瓶，裝入量不宜過多或過少。然后用試管刷將附于試管壁上的麩皮刷干凈，塞上棉塞，0.1MPa滅菌40min，即為麩皮固體培養基。該培養基應隨做隨用。

　　若需將上述培養液制成試管斜面固體培養基，應先將瓊脂稱好洗凈，煮沸培養液，在沸騰狀態下加入瓊脂（瓊脂用量一般為1.5%～2%），并不斷攪拌直至完全融化為止；溶解加熱時要注意火候，避免過熱煳底燒焦及防止溢出。當瓊脂溶化后，再加入熱水補足所蒸發的水分（可事先做好標記），然后用兩層紗布中間夾脫脂棉趁熱過濾。若冬天氣溫低容易凝固，可用熱濾漏斗過濾，過濾完畢，趁熱進行分裝，取大號玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下端連接一段橡皮管，管端與玻璃管嘴相接。橡皮管中間裝一個彈簧止水夾，將整個裝置安裝在鐵架上。分裝時用左手夾住空試管的中部，將試管伸人漏斗下的試管內，以右手拇指及食指開放彈簧止水夾，使培養液流入試管內。注意不使培養基沾污試管上段管壁，以免沾污棉塞，引起雜菌污染。裝入試管的培養基量視試管大小及需要而定。如用做保存菌種用的斜面，則裝SmL左右（15mm×150mm試管），為試管長的1/5~1/4。如用做平板用的大試管（20mm×200mm規格試管），則裝12~15 mL。分裝完畢，塞上棉塞。棉塞能過濾空氣，避免污染。做棉塞要松緊合適，緊貼管壁不留縫隙，以防空氣中雜菌沿縫隙侵入試管內。棉塞不宜過小，以免脫落，其2/3的長度應在試管內部，上部露出少許棉花，便于拔放。做棉塞用普通棉花即可�？稍诿奕�外加兩層紗布包住，這樣可延長使用時間。

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