
1.無(wú)菌箱或超凈臺(tái)
(1)無(wú)菌箱若無(wú)菌操作的工作量不大,可不利用無(wú)菌室殺菌后操作,而使用無(wú)菌箱。無(wú)菌箱置于潔凈的房間內(nèi),也可放在無(wú)菌室。無(wú)菌箱由專業(yè)廠生產(chǎn),其材質(zhì)為有機(jī)玻璃。正面有2個(gè)手孔,上面裝有袖套;左面有物料進(jìn)出的孔,以轉(zhuǎn)動(dòng)孔門(mén)的螺紋而開(kāi)閉;箱頂裝有照明燈、紫外燈,并設(shè)裝有過(guò)濾介質(zhì)的通氣柱。
(2)超凈臺(tái)設(shè)有一套空氣層流裝置。屋內(nèi)的空氣經(jīng)預(yù)過(guò)濾器,由風(fēng)機(jī)送人加壓箱,再通過(guò)超細(xì)玻璃纖維后,進(jìn)入均壓層,以水平層流恒速流至操作區(qū)。
超凈臺(tái)由專業(yè)廠生產(chǎn),有單人或雙人操作2種,可按需選購(gòu)。其氣流速度為0.3~0.5m/s,空氣凈化率能達(dá)99. 95%以上,可放置于潔凈的室內(nèi),使用時(shí)臺(tái)上盡可能少放物品,以免干擾空氣層流;也需定期檢查無(wú)菌效果。超凈臺(tái)適用于釀酒酵母及細(xì)菌的操作,對(duì)于帶孢子的霉菌則未必適用,因孢子經(jīng)空氣吹動(dòng)會(huì)飛揚(yáng)。
2.接種用具
接種用具為若干接種針及1盞酒精燈。
接種針由針部和桿部組成。針部可為23號(hào)鉑絲,但其質(zhì)地較軟;也可用粗細(xì)適當(dāng)?shù)碾姞t絲代替,但在操作時(shí)應(yīng)注意其散熱較慢的特點(diǎn)。桿部可采用市售的金屬接種棒,可將針部插入,用螺帽夾緊,也可隨時(shí)取下針部;或以長(zhǎng)20cm左右、粗細(xì)合適的銅棒為桿部,用小鉆子在其一端中央鉆1個(gè)小孔后,再將電爐絲插入孔內(nèi),然后用小錘砸牢;也有用玻璃作桿部的,將長(zhǎng)約7cm的電爐絲的一端用鑷子夾住,把另一端插入在酒精燈上加熱而融軟的玻璃棒內(nèi)。以金屬為桿部時(shí),應(yīng)在手握到的部位包以絕熱材料。
針部的一端可做成直徑約2mm的圓環(huán),稱為環(huán)狀,常用于液態(tài)種子的微量移植;針端呈針狀,常用于平板菌體與固態(tài)試管培養(yǎng)基或固態(tài)試管培養(yǎng)基與試管固態(tài)原菌之間的轉(zhuǎn)接;針端呈鉤狀,一般用于轉(zhuǎn)接固態(tài)的霉菌等菌絲體。使用后的接種針,可放人盛有酒精的量筒內(nèi)。
若移植較多的液態(tài)菌體,則需無(wú)菌吸管。吸管的玻璃部分可預(yù)先用牛皮紙包好后進(jìn)行干熱滅菌;橡皮吸頭部分,可泡于酒精內(nèi),待使用時(shí)取出。
3.高壓滅菌鍋
(1)小容量高壓滅菌鍋可以煤氣或電等為熱源。
(2)容量較大的高壓滅菌鍋 可用蒸汽為熱源。可對(duì)在高壓下不會(huì)有大變化的培養(yǎng)基及玻璃儀器進(jìn)行滅菌。有芽孢的細(xì)菌,以70kPa的蒸汽滅菌20min,或98kPa的蒸汽滅菌15min,即可完全殺滅。
滅菌鍋必須安裝壓力表和安全閥,安全閥要經(jīng)常檢查,以免生銹失效。在使用高壓鍋滅菌時(shí),一定要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡,以免造成壓力表的指示壓力已到規(guī)定值而鍋內(nèi)溫度較低的假象;滅菌結(jié)束后,要緩慢地或間歇式進(jìn)行排氣,以免降壓太快而使液態(tài)培養(yǎng)基噴染棉塞。
通常每個(gè)廠應(yīng)置備上述2種容量不同的高壓滅菌鍋,可根據(jù)平時(shí)的實(shí)際需要輪換使用。
若無(wú)高壓滅菌鍋,可用100℃的常壓蒸汽滅菌3次,即1天1次。其原理是對(duì)于普通不形成芽孢的細(xì)菌,經(jīng)100℃蒸汽滅菌30min即可全部殺滅;但芽孢桿菌則難以殺滅,然而第1次未殺死的芽孢桿菌,在30~37℃下,第2次即能變?yōu)闋I(yíng)養(yǎng)體,可被第2次的常壓蒸汽殺滅。如此3次常壓滅菌,即可保證殺菌安全,稱為間歇式滅菌法。
4.干熱滅菌箱
干熱滅菌箱設(shè)有雙層門(mén);有2組電熱絲,分別用以升溫和恒溫;箱頂有氣孔,若用于干燥,則應(yīng)配有小的風(fēng)機(jī)。使用時(shí),應(yīng)經(jīng)常注意該設(shè)備的恒溫裝置是否失靈,以免升溫過(guò)高而引起火災(zāi)。
將需滅菌的已塞棉塞的試管、三角瓶,或用牛皮紙包好的培養(yǎng)皿等玻璃用具,放入干熱滅菌箱內(nèi),注意不要使棉塞或紙接觸箱壁。以免棉塞和報(bào)紙發(fā)黃、燃燒或紙變脆而破裂。在滅菌過(guò)程或滅菌結(jié)束未降溫時(shí),不宜打開(kāi)箱門(mén),以免引起紙、棉塞燃燒和玻璃儀器破裂。
5.培養(yǎng)箱
培養(yǎng)箱又稱恒溫箱或保溫箱,使用時(shí)也應(yīng)經(jīng)常注意溫度控制系統(tǒng)是否失靈。
6.冰箱
冰箱用于存放菌種及無(wú)菌培養(yǎng)基,注意不要放液態(tài)而敞口的物品,以免液體蒸發(fā),使菌種的棉塞受潮而容易污染雜菌。
7.顯微鏡
白酒廠所用的顯微鏡為光學(xué)顯微鏡,使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容操作。
上述設(shè)備及儀器的說(shuō)明書(shū),應(yīng)由專人保管,別人借閱后須及時(shí)交還;或?qū)⒄f(shuō)明書(shū)用粗線繩串起來(lái),掛于安置設(shè)備或儀器的墻上,便于查閱。
8.玻璃器皿
(1)試管 不要使用翻口的試管。試管的長(zhǎng)度通常為其直徑的10倍。如18mm×180mm的試管,通常用于液態(tài)培養(yǎng)或盛倒平板用的固態(tài)培養(yǎng)基;15mm×150mm的試管,可裝酵母和細(xì)菌培養(yǎng)用的斜面培養(yǎng)基;lOmm×lOOmm者,用于生理試驗(yàn)或保存原菌。
(2)培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿以其直徑分為6cm、9cm、12cm、15cm、18cm、21cm等多種。
一般分離酵母或細(xì)菌時(shí)多使用直徑為9cm培養(yǎng)皿,因其操作方便且不易污染雜菌;分離霉菌等產(chǎn)生大量菌絲及孢子的微生物時(shí),可采用較大的培養(yǎng)皿。
(3)三角瓶又名錐形瓶。它以其容量定規(guī)格,應(yīng)選用帶有刻度的三角瓶。
(4)其他常用的載玻片,其大小為7.5cm x2.5cm×(0.1—0.13) cm;蓋玻片為1.8cm×1.8cm,蓋玻片有厚薄之分,薄片用于鏡檢,厚片用于血球計(jì)數(shù)計(jì)測(cè)細(xì)胞數(shù)。 涂布器:用于菌種分離及平板活菌計(jì)數(shù)時(shí)涂布平板培養(yǎng)基,可用直徑為3—4mm、長(zhǎng)25cm的玻璃棒,在酒精噴燈上將其一端彎成每邊長(zhǎng)為3cm的等邊三角形,再把該三角形平面與柄彎成140°的角即可。
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